Tris pufr je běžně používaný pH pufr, který je široce používán v biochemických experimentech. V PCR reakcích Tris pufr inhibuje aktivitu DNázy navíc k udržení stability pH. Jeho mechanismus účinku se projevuje hlavně v následujících aspektech:
1. Změňte aktivní konformaci DNázy: Kationt v Tris pufru se může vázat na aktivní místo DNázy, měnit její konformaci, čímž se snižuje její aktivita. Tento způsob účinku inhibuje aktivitu nukleáz přítomných v prostředí a chrání templát DNA před degradací.
2. Kompetitivní inhibice: Kationty v Tris se mohou kompetitivně vázat na templát DNA s aktivním centrem DNázy, čímž brání vazbě DNázy na templát a snižují její degradační aktivitu. Tato kompetitivní inhibice může snížit aktivitu DNázy způsobenou nečistotami v reakčním systému.
3. Zvyšte reakční teplotu: Tris pufr má dobrou stabilitu při vysokých teplotách, takže může zvýšit teplotu PCR reakce. Vysoká teplota může dále inhibovat aktivitu DNázy a zlepšit účinnost amplifikace DNA polymerázy. Kombinací vysokých teplot s Tris pufrem lze eliminovat účinky DNázy a získat čistší produkt PCR.
